Iris Hernández

Como se prepara un gel de agarosa para observar al ADN?

1- Para ADN genómico (0,8%)

- agarosa 0.8 gr.

- Buffer Tae 1X* hasta 100 ml.

2- Para ADN de bajo peso molecular (2%)

- agarosa 2 gr.

- Buffer Tae 1X* hasta 100 ml.

3- Tinción con bromuro de etidio. (2 opciones)

a) colocar 5 ul./100ml.(10mg/ml) una vez que el gel se entibie.

b) Preparar una cuba de tinción a la misma concentración que la opción (a), para teñir el gel luego de la corrida.

4- Preparación del soporte del gel.

a) sellar el soporte con cinta de tapicero. 2 opciones para la colocación de los peines. Depende del número de muestras. Cada peine lleva entre 13 y 19 dientes. Se coloca uno o los dos peines.

b)Pesar la agarosa, ponerla en un matraz de 250ml. agregar la solución de TAE 1X, tapar con papel de plomo para evitar la evaporación y consecuente pérdida de concentración.

c) Calentar la solución hasta llegar al punto de ebullición (100ºC). Agitar hasta que la solución quede transparente. Unas dos veces retirar del calor (mechero). Dejar que entibie. Opcional la colocación del EtBr. Una vez tibia volcar la solución en el soporte armado, verificando que no queden burbujas. Si queda alguna, se absorbe con un tip.

d) Colocar el o los peines antes que solidifique la preparación. Una vez frío el gel quitar las cintas al soporte y sumergirlo en la cuba de electroforésis. Quitar el o los peine suavemente quedando los posillos marcados para la colocación de las muestras.